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薄層層析板相關(guān)操作詳細(xì)步驟

更新時間:2015-04-16      點(diǎn)擊次數(shù):1283

1,薄層層析板裝柱。
  柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑,會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的,可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別,只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密(太密了淋洗劑走的太慢),一定要均勻(不然樣品就會從一側(cè)斜著下來)。書中寫的都是不能見到氣泡,我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響,一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開裂,甭管豎的還是橫的,都會影響分離效果,甚至作廢!
2,薄層層析板加樣。
  用少量的溶劑溶樣品加樣,加完后將下面的活塞打開,待溶劑層下降至石英砂面時,再加少量的低極性溶劑,然后再打開活塞,如此兩三次,薄層層析板一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑,一開始不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離(2~4cm就夠了),再加壓,這樣避免了溶劑(如二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。
3,薄層層析板淋洗劑的選擇。
  感覺上要使所需點(diǎn)在rf0.2~0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開,過柱子就用那種極性,如果rf在0.6,即使相差0.2也不容易在柱子上分開,因為柱子是一個多次爬板的狀態(tài),可以通過公式的比較:0.6/0.8一次的分離度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。5.4 樣品的收集。
  用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話,就不容易流出。這樣就會發(fā)生,后面的點(diǎn)先出,而前面的點(diǎn)后出。這時可以采用氧化鋁作固定相。
  另外,收集的試管大小要以樣品量而定,特別是小量樣品,如果用大試管,可能一根就收到了三個樣品。如果都用小試管那工作量又太大。
4,zui后的處理。
  柱分后的產(chǎn)品,由于使用了大量的溶劑,其中的雜質(zhì)也會累積到產(chǎn)品中,所以如果想送分析,用少量的溶劑洗滌一下,因為大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的,一洗基本就沒了,必要時進(jìn)行重結(jié)晶.

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