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薄層層析板常用制備方法供參考

更新時(shí)間:2016-03-16      點(diǎn)擊次數(shù):1880
這是實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)室薄層層析板常用的制備方法之一,供大家參考。
 
薄層層析板制備方法有很多,有手工的,也有機(jī)械的。如果薄層層析板用量較少,可以用手工的,如果用量較大,還是用機(jī)械的更加方便快捷! 
 
下面先介紹一下薄層層析板配置方法:
  1. 鋪板:手動(dòng)或機(jī)械。手動(dòng)鋪出的板的薄厚與所加的混合后的硅膠量有關(guān),而機(jī)械鋪出的板的薄厚與機(jī)械所選用的鋼板有關(guān),可根據(jù)需要來定。但此過程中zui關(guān)鍵的是板子邊緣鋪得好壞,手動(dòng)鋪板一定要將玻璃板邊緣硅膠涂勻(我習(xí)慣用兩頭掂法,即板下方的中間墊一物體,兩頭懸空,兩手均勻掂動(dòng))。而機(jī)械鋪板要注意板與板之間平整性,或者由高到低排列。
  2. 晾干:自然晾干。
  3. 活化:將晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min,取出,放入干燥器中,備用。
  4. CMC-Na溶液的配置:一般其濃度為0.3~0.5%,根據(jù)自己經(jīng)驗(yàn)而定(我習(xí)慣用0.4%的)。具體方法如下:先將預(yù)用的水加熱至60~70℃,然后加入CMC-Na,邊加邊攪拌,使之溶解,即得。
  5. 與硅膠混合:CMC-Na溶液與硅膠的比例為3:1。具體方法如下:先將CMC-Na溶液倒入自動(dòng)攪拌器或研缽中,然后加入硅膠,攪勻即可。若是在研缽中研磨,按一個(gè)方向研磨,自下而上,然后自上而下,以趕盡氣泡為佳。
 
薄層層析板鋪板
    鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠,板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發(fā)后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來定,與空氣濕度有關(guān),一般通過拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外,也影響板涂層的厚度,進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄,點(diǎn)樣易過載;涂層厚,顯色不那么明顯。通常,板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大,影響zui大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。
 
點(diǎn)樣
    盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性,只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣,點(diǎn)的斑點(diǎn)較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。
 
展開劑配制
    選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑?;旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑,會(huì)造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求,盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的zui高度,比如:取1ml的溶劑,應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管,移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求,盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。
 
展開系統(tǒng)的飽和
    一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺(tái),斜架著,蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和,防止邊沿效應(yīng),飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開時(shí)難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中,不過對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。 
 
溫濕度的控制
    溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下,通常溫度越低分離越好,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷。濕度的影響,估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力,導(dǎo)致選擇性(容量因子)的變化,濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。
 
薄層層析板顯色
    噴顯色劑顯色zui重要是有好的霧化器。
 
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